Морфологическая диагностика. Подготовка материала для гистологического исследования и электронной микроскопии

Оглавление

Коллектив авторов. Морфологическая диагностика. Подготовка материала для гистологического исследования и электронной микроскопии

ПРИНЯТЫЕ СОКРАЩЕНИЯ

ПРЕДИСЛОВИЕ

Раздел I. ПОДГОТОВКА МАТЕРИАЛА ДЛЯ ГИСТОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ

Глава 1. ФИКСАЦИЯ МАТЕРИАЛА ДЛЯ ГИСТОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ

1.1. Общие положения

1.2. Фиксация материала для световой микроскопии

1.2.1. Ацетон

1.2.2. Этанол

1.2.3. Сложные фиксирующие жидкости, содержащие этанол

1.2.4. Метанол

1.2.5. Изопропанол

1.2.6. Уксусная кислота

1.2.7. Формалин

1.2.8. Пикриновая кислота и жидкость Буэна

1.2.9. Другие фиксаторы общего назначения

1.3. Фиксация материала для иммуноцитохимического исследования

Глава 2. ДЕКАЛЬЦИНАЦИЯ КОСТНОЙ ТКАНИ

2.1. Общие сведения о декальцинации

2.2. Кислотная декальцинация

2.3. Декальцинация при иммуногистохимическом исследовании

2.4. Контроль эффективности декальцинации

Глава 3. ОБЕЗВОЖИВАНИЕ ОБЪЕКТОВ И ЗАЛИВКА В ПАРАФИН

3.1. Обезвоживание материала

3.2. Заливка объектов в парафин

3.3. Применение целлоидина при заливке в парафин

Глава 4. ИЗГОТОВЛЕНИЕ СРЕЗОВ И ИХ НАКЛЕЙКА

4.1. Изготовление срезов

4.2. Подготовка предметных стекол

Глава 5. ПОДГОТОВКА СРЕЗОВ К ОКРАШИВАНИЮ И ЗАКЛЮЧЕНИЕ ГИСТОЛОГИЧЕСКОГО ПРЕПАРАТА

5.1. Депарафинирование и регидратация срезов перед окраской

5.2. Дегидратация, просветление и заключение срезов после окраски

Глава 6. КРАСИТЕЛИ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ГИСТОЛОГИИ И ЦИТОЛОГИИ

6.1. Гематоксилин

6.1.1. Квасцовые гематоксилины

6.1.2. Железные гематоксилины

6.2. Эозин и обзорные методы окраски

6.2.1. Обзорная окраска препаратов гематоксилином и эозином

6.2.2. Обзорная окраска азур-эозином

Глава 7. СПЕЦИАЛЬНЫЕ МЕТОДЫ ОКРАСКИ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ ДЛЯ ИЗУЧЕНИЯ СТРУКТУР КЛЕТОЧНОГО ЯДРА

7.1. Реакция Фельгена

7.2. Выявление ядрышек в интерфазных клетках при помощи метода AgNOR

7.2.1. Импрегнационный метод выявления ядрышек в ядрах клеток разных тканей

7.2.2. AgNOR-метод, рекомендуемый для парафиновых срезов и фиксированного в формалине материала

7.3. Выявление структурных изменений ядра, характерных для апоптоза

Глава 8. МЕТОДЫ ОКРАСКИ СОЕДИНИТЕЛЬНОЙ ТКАНИ

8.1. Окраска препаратов по Ван-Гизону

8.2. Окраска соединительной ткани по методу Маллори

8.3. Окраска соединительной ткани по Маллори в модификации Слинченко

8.4. Выявление эластических волокон

Глава 9. СПЕЦИАЛЬНЫЕ МЕТОДЫ ОКРАСКИ

9.1. Выявление фибрина методом ОКГ по Зербино

9.2. Выявление повреждений миокарда по Ли – ГОФП

9.3. Окраска хроматофильной субстанции нервных клеток по Нисслю

9.3.1. Окраска нервных клеток по Нисслю крезиловым фиолетовым

9.3.2. Окраска нейронов по методу Ниссля в авторской прописи

9.3.3. Окраска нейронов по методу Ниссля готовым красителем (толуидиновый синий («БиоВитрум»))

9.4. Окраска миелиновых волокон

9.5. Окраска микроорганизмов метиленовым синим Лефлера

9.6. Окраска микроорганизмов по Граму – Вейгерту

9.7. Окраска микобактерий карболовым фуксином по Цилю – Нильсену

Глава 10. ГИСТОХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ОКРАШИВАНИЯ ГИСТОЛОГИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ

10.1. Выявление включений амилоида

10.1.1. Окраска амилоида по Беннхольду (1922)

10.1.2. Окраска амилоида толуидиновым синим

10.1.3. Флуоресцентные методы выявления амилоида

10.2. Выявление металлов

10.2.1. Выявление соединений железа (III) по Перлсу

10.2.2. Выявление соединений меди по Хоуэлу

10.2.3. Выявление соединений свинца

10.3. Выявление гемоглобина и гемоглобинурийных пигментов

10.4. Выявление нейтральных жиров жирорастворимыми красителями

10.4.1. Выявление нейтральных жиров по Чиффеле и Путту

10.4.2. Выявление нейтральных жиров по Лилли и Ашберну

10.5. Выявление углеводов и мукополисахаридов

10.5.1. Выявление гликогена по Мак-Манусу

10.5.2. Выявление слизи альциановым синим

10.6. Комбинированная окраска тучных клеток и эозинофильных лейкоцитов по Сухоруковой и Ворончихину

Раздел II. ПОДГОТОВКА МАТЕРИАЛА ДЛЯ ЭЛЕКТРОННОЙ МИКРОСКОПИИ

Глава 11. ВВЕДЕНИЕ В ЭЛЕКТРОННУЮ МИКРОСКОПИЮ

Глава 12. ОСОБЕННОСТИ ПОДГОТОВКИ МАТЕРИАЛА ДЛЯ ЭЛЕКТРОННО-МИКРОСКОПИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ

12.1. Фиксация материала

12.2. Дополнительная (вторичная) фиксация материала

12.3. Проводка материала

12.4. Приготовление растворов для фиксации и постфиксации

Глава 13. УЛЬТРАТОМЫ И ТЕХНИКА ИЗГОТОВЛЕНИЯ СРЕЗОВ

13.1. Получение полутонких срезов

13.2. Ультратонкие (тонкие) срезы

13.2.1. Нож для ультратомии

13.2.2. Получение ультратонких срезов

13.3. Извлечение срезов

Глава 14. ОКРАШИВАНИЕ И КОНТРАСТИРОВАНИЕ

14.1. Окрашивание полутонких срезов

14.2. Контрастирование ультратонких срезов

14.3. Приготовление растворов для контрастирования срезов

ПРИЛОЖЕНИЯ

Приложение 1. Лабораторный менеджмент: организация рабочего процесса в гистологической лаборатории

Приложение 2

Отрывок из книги

БСА – бычий сывороточный альбимин

ГОФП – гематоксилин-основной фуксин-пикриновая кислота

.....

Сочетание этанола с формальдегидом. Существует несколько вариантов прописи фиксатора, состоящего из этанола и формалина (или параформальдегида). Чаще всего используют 5 – 10 %-й раствор формалина на основе спирта различной крепости (от 70 %-го до абсолютного). Для иммуноцитохимических исследований рекомендуется использовать 1 – 2 %-й раствор формалина (или 0,5 – 0,7 %-й раствор параформальдегида) на 80 %-м этаноле.

Для приготовления 100 мл фиксатора берут 98 мл 80 %-го этанола и 2 мл концентрированного формальдегида. Если используется сухой параформальдегид, фиксатор удобнее готовить следующим образом. Заранее готовится 4,0 %-й водный раствор параформальдегида, который может длительно сохраняться. Для этого параформальдегид растворяют в дистиллированной воде при нагревании (проще всего закрытую емкость оставить в термостате при 37 или 56 °C на 1 – 3 сут, несколько раз перемешивая раствор в течение дня). На каждые 80 мл 96 %-го этанола добавляют по 15 мл полученного водного раствора параформальдегида.

.....