Читать книгу Manual práctico de ensayos de toxicidad en medio acuático con organismos del género Daphnia - Pedro Miguel Escobar Malaver - Страница 4

Los ensayos de toxicidad son pruebas diseñadas para evaluar la potencia relativa de un agente o una sustancia contaminante sobre una o más especies de organismos de los sistemas biológicos acuáticos y terrestres, al tiempo que permiten caracterizar la relación concentración-respuesta entre el agente contaminante y el organismo sometido a prueba. La toxicidad de una sustancia es la propiedad que tiene esta de causar daños a la salud humana o la muerte de un organismo vivo, mediante la comparación del efecto del agente con el de una solución patrón o estándar.

Los resultados de las pruebas de toxicidad en sistemas acuáticos constituyen un criterio importante para determinar el efecto y el riesgo de la descarga de sustancias contaminantes sobre los ecosistemas acuáticos, así como para establecer valores límites permisibles para el control de sustancias tóxicas que son incorporadas a los ecosistemas acuáticos.

Con el auge de la ecotoxicología —ciencia que predice los efectos de los agentes potencialmente tóxicos en los ecosistemas naturales (Hoffman, 1995)— se ha reforzado la idea de realizar monitoreos y pruebas de toxicidad para la detección, predicción y control de los efectos de diferentes tipos de sustancias sobre los ecosistemas, en particular, el acuático.

La evaluación más común de la toxicidad es la medida de la letalidad a corto plazo. Para una sustancia o vertimiento dado, esta medida implica la determinación de la concentración media que es letal para una porción fija (50%) de una población de organismos de prueba, después de una exposición continua durante un tiempo fijo denominada CL50 (concentración letal media).

Los organismos pertenecientes al género Daphnia son ampliamente utilizados como especie test o de referencia para la realización de pruebas de toxicidad, ya que son representantes importantes de la comunidad zooplanctónica, presentando generaciones cortas, con altas tasas reproductivas, de fácil aclimatación a condiciones de laboratorio (Bruce, 2005).

El procedimiento para la realización de las pruebas de toxicidad acuática, generalmente, incluye las siguientes fases:

1) selección y ubicación del sitio de muestreo de organismos de prueba;

2) recolección de organismos de prueba;

3) verificación del tipo de microorganismo seleccionado;

4) cultivo y mantenimiento de los organismos de prueba;

5) alimentación de los organismos de prueba;

6) preparación del medio de cultivo para algas y centrifugación de algas verdes;

7) preparación del agua reconstituida;

8) preexperimentación (pruebas de sensibilidad y pruebas preliminares);

9) determinaciones físico-químicas de las condiciones de los ensayos;

10) experimentación;

11) obtención y cálculo de la CL50 para el tiempo de exposición preestablecido.

La información obtenida de las pruebas de toxicidad en un medio acuático puede aplicarse al establecimiento de criterio de calidad del agua, asegurando niveles de concentración de sustancias cuestionables, y en la evaluación del posible impacto de sustancias sobre el medio acuático, con el fin de reglamentar la calidad de efluentes específicos para establecer un límite aceptable o para determinar el grado de tratamiento de vertimientos industriales en su lugar de origen.

El presente manual es el resultado de la dedicación y experiencia de los investigadores del Laboratorio de Bioensayos, a partir de un proyecto de investigación realizado en la Universidad de La Salle en el año 2007, que utilizó como sustancias tóxicas el arsénico (As) y el níquel (Ni), y como organismo de prueba la pulga de agua o Daphnia pulex. En tal sentido, se presentan los siguientes protocolos como ayuda fundamental para la realización de pruebas de toxicidad, tanto de sustancias químicas puras, como de efluentes, lixiviados, agua potable y aguas naturales superficiales y subterráneas.

Los protocolos descritos incluyen los procedimientos desde el montaje del cultivo y mantenimiento de los organismos de prueba, así como la realización de pruebas de toxicidad, sensibilidad del organismo utilizado y validación de los resultados, que comprenden las recomendaciones de entidades internacionales, tales como la CETESB (Companhia de Tecnologia de Saneamento Ambiental 'Compañía de Tecnología de Saneamento Ambiental', 1992); la USEPA (United States Environmental Protection Agency 'Agencia de Protección Ambiental de Estados Unidos), 1994), y la ASTM (American Section of the International Association for Testing Materials, 1986); por lo cual se obtuvo una base teórico-práctica para la realización de futuros estudios que ayuden a conocer los límites permisibles de las diferentes sustancias presentes en un cuerpo de agua para su posterior aplicación en la regulación que, por parte de las entidades del Estado, están a cargo de la protección del medioambiente acuático.

Los protocolos que incluyen el presente manual de pruebas de toxicidad acuática son:

LB01 Preparación del agua reconstituida.

LB02 Preparación del medio Bristol y cultivo de algas verdes.

LB03 Conteo de algas con la cámara Neubauer.

LB04 Mantenimiento del cultivo Daphnia pulex.

LB05 Pruebas de toxicidad.

LB06 Análisis de resultados mediante el método probit.

LB07 Análisis de varianza (Anova).