Читать книгу Возможно ли преодолеть старение? Сегодня и завтра клеточной терапии - Леонид Юрьевич Прохоров - Страница 9

По мнению одного из ведущих специалистов в области применения аутогенных фибробластов кандидата биологических наук А. А. Згурского (Згурский, 2004) процедура имеет несколько привлекательных моментов для косметолога и, соответственно, для пациента:

— используются собственные клетки пациента;

— обычно проводится однократное взятие биопсии;

— имеется небольшой дискомфорт в процессе применения процедур для пациента;

— эффект сохраняется длительное время;

— простота применения;

— проводится небольшое число процедур, необходимое для получения эффекта;

— отсутствуют осложнения и побочные эффекты.

Аутогенные фибробласты применяют для коррекции морщин, атрофических рубцов, атрофических участков кожи, нарушений структуры кожи (Boss et. al., 2000).

В результате применения:

– замедляется старение кожи;

– улучшается цвет кожного покрова;

– разглаживаются глубокие и исчезают мелкие морщины;

– повышается упругость и эластичность соединительной ткани кожи;

– имеется значительный эффект при коррекции рубцов и носогубных складок через 7 и 12 мес.

В первые часы после введения клеток наблюдаются местные эффекты в виде гиперемии (местное увеличение притока крови) и небольшого отека, которые исчезают через 2—3 ч. после процедуры. Положительный эффект начинает проявляться через 6—8 ч. после процедуры, что выражается в увеличении тургора (упругости) и эластичности кожи, ее кровоснабжения. Отмечен положительный эффект, заключающийся в исчезновении мелких и уменьшении крупных морщин (Крихели и др., 2004). Улучшение кожи происходит в течение нескольких месяцев. Сохранение положительного эффекта прослеживается на протяжении 12 мес. Пример применения аутогенных фибробластов для лечения носогубных складок показан на рис. 10а и 10б. На рис. 11а и 11б приведен пример улучшения поверхности кожи около глаз: рис. 11а – область глаза до процедур, рис 11б – через несколько месяцев после применения терапии. Видно, что количество и глубина морщин после процедур заметно уменьшилось. На рис. 12а и 12б показан результат лечения лобных морщин.

Некоторые специалисты пришли к заключению, что лечение морщин с помощью аутологичных фибробластов является наименее трудоемким и наиболее эффективным методом коррекции морщин в клинической практике. Этот метод представляется единственным, эффективно убирающим рубцовые изменения после угревой сыпи (Рис. 13а и 13б). По данным доктора Арнольда Клейна (США) эффективность метода достигает 95%.

Основные свойства фибробластов сохраняются при культивировании их вне организма. Эти клетки:

– сохраняют диплоидный кариотип в течение жизни;

– имеют ограниченную продолжительность жизни;

– обладают свойством контактного торможения делений и требуют прикрепления к субстрату (дну культурального флакона) для пролиферации;

– у клеток отсутствует онкогенная потенция, т.е. имеется безопасность применения аутологичных фибробластов (Келлер и др., 2000),

– отсутствуют опухоли у бестимусных мышей через 2 мес. после введения 40 млн. клеток;

– имеют нормальную сократительную способность в отношении коллагена;

– сохраняют активный синтез коллагена I типа после культивирования in vitro в течение 6 пассажей.

В одной из фирм США утверждается, что ими выполнены уже тысячи подобных процедур, пролечены тысячи пациентов. С помощью подобных методик в косметологии исправляют возрастные изменения кожи лица, морщины, рубцы кожи. Применение собственных клеток оправдано тем, что отсутствует реакция отторжения, часто возникающая при использовании клеток других людей, как эмбриональных, так и тем более полученных от взрослых доноров. Кроме того, нет этических проблем, возникающих при использовании эмбриональных клеток.

Примеры применения методик показаны также на других рисунках. Так, на рис. 14а, 14б и 14в показан вид лица пациентки с носогубной складкой (морщина) до процедуры применения аутогенных фибробластов (Рис. 14а), во время клеточной терапии (Рис. 14б) и спустя 6 месяцев после (Рис. 14в). Хорошо видно, что морщина значительно уменьшилась (разгладилась) и практически исчезла. Это произошло за счет того, что введенные аутогенные фибробласты прижились и начали вырабатывать новый, молодой коллаген и эластин.

На других рисунках (Рис. 15а и 15б) можно видеть часть участка лица пациентки до процедуры введения аутогенных фибробластов (Рис. 15а) и спустя 4—6 месяцев после выполнения терапии (Рис. 15б). Стрелкой показан дефект кожи до терапии и после. Дефект – рубцовая поверхность на щеке после удаления бородавки (Watson et al., 1999).

Возможны исправления иных подобных старческих изменений кожи (Weiss et al., 2007).

КРИОХРАНИЛИЩЕ

После применения клеточной терапии часть клеток может оказаться неиспользованной. Эти клетки следует сохранить для того, чтобы повторять процедуры в отдаленном будущем.

Для сохранения собственных клеток необходимо поместить их в специальное криохранилище. Оно представляет собой дюралюминиевую или стальную емкость, выполненную по типу термоса, с двойными стенками, между которыми создается вакуум. В неё заливается жидкий азот, имеющий температуру минус 196⁰С (Рис. 16а и 16б).

Перед замораживанием клетки отмывают от ростовой среды и выдерживают в защитном растворе, который предотвращает их от повреждения при низкой температуре. Затем суспензию клеток заливают в специальные стерильные пластмассовые ампулы, закрывающиеся герметично. Эти ампулы с клетками внутри вначале подвергаются постепенному плавному охлаждению до минус 70—80⁰С, после чего погружаются в жидкий азот в криохранилище, где они сохраняются долгие годы и десятилетия. Каждой криопробирке присваивается свой индивидуальный идентификационный номер, который заносится в компьютерную базу. Этот номер строго соответствует тому человеку, у которого взяли клетки. В базе содержатся следующие данные: имя, отчество и фамилия человека, дата рождения, характеристика крови, сведения о наследственных заболеваниях, дата взятия биопсии, некоторые другие сведения.

Компьютерная база существует не только в самом компьютере, но информация также дублируется на компакт диски или на USB-флэш-накопители (флэшки), которые хранятся в специально выделенном месте. Это исключает потерю информации. Само криохранилище постоянно находится под присмотром дежурного персонала, к нему исключен доступ посторонних лиц, а все манипуляции с контейнерами производит только тщательно обученный персонал, несущий личную ответственность за сохранность клеточного материала.

В таком криохранилище фибробласты или другие клетки могут храниться неограниченное время, а при необходимости часть их можно извлечь, разморозить, размножить и применить для клеточной терапии кожи, органов или других целей в будущем.