Читать книгу Métodos analíticos de microbiología general y aplicada - Jorge Luna Fontalvo - Страница 10

Según el número de colorantes utilizados, las tinciones se pueden agrupar en dos categorías: tinciones simples (en las cuales se emplea un solo colorante) y tinciones compuestas o diferenciales (en las que se emplea más de un colorante).

•Tinción simple: consiste en la aplicación de un solo colorante al extendido previamente fijado, con lo cual se aumenta el contraste de las células para poder observarlas claramente. Uno de los colorantes más indicados es el azul de metileno, que actúa rápida y suavemente sobre todas las células bacterianas y no oscurece los detalles celulares. Además, es especialmente útil para detectar la presencia de bacterias en muestras naturales puesto que la mayor parte del material no celular no se tiñe (Gamazo, et ál., 2005). La tinción simple tiene como objetivo determinar la morfología y agrupación que presentan las bacterias (figura 1).

•Tinciones compuestas o diferenciales: son aquellas en la que se emplea más de un tipo de colorante, por lo que todas las células de la muestra no quedan teñidas iguales. Esto permite poner en evidencia, aparte de la morfología de los microorganismos y su agrupación, algunas estructuras como endosporas, flagelos, depósitos de grasas y la reacción de las bacterias frente a un colorante específico. En esta guía de práctica se realizarán las tinciones diferenciales de Gram, Writz y Ziehl-Neelsen:

•Tinción de Gram: el organelo responsable de la tinción de Gram es la pared celular. La propiedad de teñirse o no de violeta oscuro según la tinción introducida por Christian Gram (1884) es una característica taxonómica importante con la que se correlacionan también otras propiedades de las bacterias. Este procedimiento se inicia con una tinción de las células bacterianas fijadas mediante el colorante básico cristal violeta. A continuación se trata con una solución de yodo (lugol), el cual forma una laca con el cristal violeta, que es insoluble en agua y solo medianamente soluble en alcohol o acetona. Las células se tratan después con alcohol acetona, de modo que las células Gram positivas retienen el complejo colorante-yodo y quedan azules, y las células Gram negativas son decoloradas por el alcohol acetona. Estas últimas se hacen visibles mediante una coloración de contraste con otro colorante como la fucsina o safranina (Schlegel, 1997). La tinción de Gram tiene como objetivo identificar la morfología de las células bacterianas, su agrupación y la reacción al Gram (Gram positiva o Gram negativa).

•Tinción de Wirtz: esta tinción permite colocar en evidencia las endosporas bacterianas, cuyos constituyentes químicos son capaces de retener fuertemente el colorante verde de malaquita al 7,6%, adquiriendo el color de éste, mientras que el resto de la célula bacteriana se tiñe del color del colorante de contraste utilizado. La tinción de Wirtz tiene como objetivo determinar la presencia de las endosporas, aparte de observar la morfología de la célula y su agrupación.

•Tinción de Ziehl-Neelsen (ZN): esta tinción fue instituida por el bacteriólogo Franz Ziehl y el patólogo Friedrich Neelsen. Principalmente se emplea para aquellas bacterias difíciles de teñir como las del género Mycobacterium también conocidas como bacterias ácido-alcohol resistentes (AAR). En esencia son bacterias Gram positivas, pero no retienen el colorante cristal violeta debido a que tienen una pared muy gruesa hidrofóbica, cerosa y rica en ácidos micólicos, lo cual les confiere resistencia a muchos colorantes. La tinción utiliza el colorante fucsina fenicada (colorante primario), el cual debe aplicarse en condiciones de calor, pero sin dejar secarlo con el fin de que penetre la pared celular de las bacterias. Posteriormente, se aplica una mezcla de ácido y alcohol (decolorante), y por último, el colorante de contraste (azul de metileno). Las células ácido-alcohol resistentes permanecen teñidas de fucsia ya que retienen el primer colorante, mientras que las no resistentes se decoloran con el ácido-alcohol y se teñirán de azul con el colorante de contraste (Gamazo, et ál., 2005). La tinción NZ tiene como objetivo determinar la resistencia al alcohol ácido, aparte de la morfología y agrupación de las células bacterianas.

Figura 1. Morfología y agrupación de las células bacterianas.