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III. Métodos de siembra y aislamiento de bacterias

Introducción

La técnica más usada en el laboratorio de microbiología es el traspaso o siembra de microorganismos de un ambiente a otro con el objetivo de: 1) permitir la sobrevivencia de los microorganismos, para lo que requieren un aporte continuo de nutrientes y una eliminación constante de sus productos de desecho, y 2) estudiar su estructura metabólica, bioquímica y función en sustratos.

El estudio de cualquier microorganismo requiere que se examine una sola especie a la vez. El método analítico no se puede aplicar cuando se tiene una mezcla de varias especies, es decir, un cultivo mixto. Por eso es necesario siempre trabajar con un cultivo puro, que se define como aquel que ha sido originado a partir de una sola célula. Idealmente, se debería aislar una sola bacteria y luego transferirla a un medio de cultivo estéril para que se multiplique hasta obtener una gran población, todas derivadas de una única bacteria parental. De esta manera todas las bacterias multiplicadas corresponden a clones que contienen la misma información genética, exceptuando aquellas que mutan de manera espontánea. A pesar de lo difícil que es aislar una sola célula, existen técnicas capaces de aproximar este ideal (Arias y Gómez, 2001).

El primer paso en el cultivo de los microorganismos es la siembra, la cual se puede realizar de diversas formas, ya sea a través de inoculaciones en superficie, profundidad o por agotamiento (Thatcher y Clard, 1993). Por tanto, todas estas técnicas varían de acuerdo con las características del microorganismo, el interés del investigador y el objeto final del estudio. Entre los métodos de siembra empleados para el estudio de las bacterias se encuentran:

•Siembra en medio líquido: este tipo de siembra se realiza en tubos de ensayos que contienen caldos. Generalmente se emplean para el mantenimiento y activación de cepas en el laboratorio, como también en la determinación de reacciones fermentativas, para lo cual el tubo de ensayo deberá contener en su interior un pequeño tubo invertido conocido como campana Durham. La siembra en medio líquido se realiza traspasando de un cultivo bacteriano, ya sea en medio sólido o líquido, a un nuevo tubo de ensayo que contiene el caldo estéril.

•Siembra en superficie con rastrillo: se emplea para el análisis de muestras de agua, suelo y alimento. Permite obtener colonias y estimar la densidad poblacional de microorganismos de metabolismo aerobio o facultativo. Por esta razón la siembra en superficie se relaciona directamente con la técnica del recuento directo en placa (recuento por dilución). Para esta siembra se maneja el asa o rastrillo de Digralsky, con el cual se extiende la alícuota de la muestra sobre la superficie del medio de cultivo sólido contenido en una placa de Petri.