Читать книгу Métodos analíticos de microbiología general y aplicada - Jorge Luna Fontalvo - Страница 15

—Tome los portaobjetos que contienen los frotis destinados para la tinción de Gram. Para este caso se recomienda trabajar con los frotis de las bacterias E. coli, S. aureus y B. cereus.

—Deposite ahora los portaobjetos con su muestra fijada sobre la rejilla.

—Tiña con cristal violeta durante un minuto.

—Elimine el colorante y lave suavemente con agua.

—Aplique lugol (mordiente) durante un minuto.

—Elimine el lugol y lave con agua.

—Decolore con una solución de alcohol-acetona durante 10-30 segundos (el tiempo dependerá del grosor del frotis).

—Elimine el alcohol-acetona y lave con agua.

—Tiña con fucsina o safranina (contraste) por un minuto.

—Elimine el colorante de contraste y lave con agua.

—Seque con papel absorbente presionando suavemente los portaobjetos y luego expóngalos de forma muy suave a la llama del mechero.

—Observe las preparaciones al microscopio, primero con los objetivos de menor aumento (10X, 40X) y busque la zona donde depositó la muestra. Una vez logrado esto, enfoque con el objetivo de inmersión (100X) tal como lo hizo en la tinción simple.

—Termine la observación identificando la morfología, la agrupación y la reacción al Gram de las bacterias observadas y esquematícelas.

—Elimine las preparaciones en la bandeja.

Figura 4. Pasos de la tinción de Gram.